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乳清蛋白是采用先进工艺从牛奶中分离提取出来的珍贵蛋白质，以其具有高生物价、高消化率、高蛋白质功效比和高利用率等优点，被誉为“蛋白之王”，是公认的人体优质蛋白质补充剂之一。其含量的高低决定了婴幼儿奶粉的品质，相关国标通过酸水解以后的氨基酸来评价乳清蛋白的含量，月旭科技推出的检测方法检测更加快捷可靠。
样品前处理
称取0.1g试样（含蛋白质7.5mg-25mg的样品），于水解管中，在冰水浴中冷却30min后加入2mL已经冷却的过甲酸溶液，盖好瓶塞后置于0℃±1℃冰箱中，冰浴16h。向各水解管中加入0.3mL氢溴酸，振摇后冰浴30min，在60℃±2℃氮吹仪上浓缩至干。向水解管内加入6moL/L盐酸10mL，冲入氮气1min后，拧紧螺丝盖，将水解管放在℃±1℃的恒温干燥箱内水解24h后取出冷却至室温。将水解液用超纯水转移并定容至25mL容量瓶中，混匀，滤纸过滤。吸取滤液1mL于60℃±2℃氮吹仪上浓缩至干，残留物用1mL超纯水溶解，待衍生。
标准品溶液
用超纯水配置磺基丙氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸标准品溶液1μmoL/mL，待衍生。
衍生方法
分别将月旭科技氨基酸衍生方法包中A、B两种衍生试剂用稀释剂稀释至原来浓度的1/5；精密量取混标溶液及样品溶液各μL，加入稀释后的衍生溶液A、B各μL，混匀，室温反应60min；然后加入正己烷溶液μL，旋紧盖子后振摇10s，室温静置分层，取下层液μL，加入μL水中，混匀；再移取μL加入到μL水中，混匀，用0.45μm有机滤膜过滤，即得。
色谱条件
色谱柱：月旭Ultimate?AQ-C18（4.6×mm，3μm）。
流动相
时间
（min）
流动相A
（0.1mol/L醋酸钠pH6.5）%
流动相B
（乙腈/水80:20）%
0
0
11
93
7
13.9
88
12
14
80
20
29
66
34
35
30
70
38
0
45
0
48
0
65
0
柱温：40℃；
紫外检测器：nm；
流速：1.0mL/min；
进样量：5μL。
谱图和数据
1.磺基丙氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸标准品溶液1μmoL/mL。
保留
时间
峰宽
面积
峰高
拖尾因子
分离度
塔板数
8.28
0.56
48.23
6.66
1.08
_.92
8.97
0.30
1.73
0.26
1.05
3.67
.12
9.26
0.43
41.28
5.52
1.07
1.58
.84
21.27
0.28
59.72
13.76
1.04
76.77
.95
21.60
0.29
73.40
16.51
1.01
2.85
.47
34.13
0.41
67.41
10.76
1.04
88.24
.80
__.76
____2.样品水解
保留
时间
峰宽
面积
峰高
拖尾因子
分离度
塔板数
8.30
0.34
2.60
0.37
1.04
_.97
9.29
0.45
4.97
0.66
1.06
5.07
.65
21.
0.29
12.14
2.73
0.99
76.25
.37
21.59
0.23
21.36
4.83
1.05
2.79
.46
34.12
0.34
6.77
1.09
1.04
88.40
.02
__47.84
____结论
用月旭Ultimate?AQ-C18（4.6×mm，3μm）色谱柱，在该色谱条件下测定，能满足实验需求。
如果您想了解更多内容，欢迎联系月旭科技销售人员或拨打--服务热线，我们将竭诚为您服务。
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